吡唑酮類藥殘留測定——流動(dòng)注射-化學(xué)發(fā)光法

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

14.1.4.2測定方法

動(dòng)物源樣品中吡唑酮類藥物的測定方法主要有流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光檢測法、超臨界流體色譜法(SFC)、毛細(xì)管電泳法(CE)、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)和免疫分析法等。色譜法(包括色質(zhì)聯(lián)用法)具有更好的分辨率、靈敏度和重復(fù)性，是目前殘留分析中采用最多的技術(shù);而免疫分析方法具有簡便、快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于殘留分析越來越受到重視。

(1)流動(dòng)注射-化學(xué)發(fā)光法(flow injection-chemiluminescence detection，F(xiàn)I-CL)

流動(dòng)注射-化學(xué)發(fā)光分析法是將流動(dòng)注射與化學(xué)發(fā)光相結(jié)合的-種分析方法。流動(dòng)注射是指在非熱力學(xué)平衡條件下，在液流中重現(xiàn)處理試樣或試劑區(qū)帶的定量流動(dòng)分析技術(shù)，它具有高精度、高效率、快速的特點(diǎn)?；瘜W(xué)發(fā)光是基于反應(yīng)體系中某種物質(zhì)(反應(yīng)物、產(chǎn)物、中間體)的分子吸收了反應(yīng)所釋放的能量而由基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，然后再從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)，同時(shí)將能量以光輻射的形式釋放出來產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。基于分子發(fā)光強(qiáng)度和被測物含量之間的關(guān)系建立的分析方法稱為化學(xué)發(fā)光分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡單等優(yōu)點(diǎn)。將二者結(jié)合而產(chǎn)生的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析法具有分析速度快、精度高、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等特點(diǎn)。何云華等將流動(dòng)注射，分子印跡技術(shù)與化學(xué)發(fā)光檢測方法相結(jié)合，分析尿液中的安乃近。利用MIP對目標(biāo)分子的識別和捕獲能力，使目標(biāo)分子吸附在MIP上，從而與樣品中的共存物質(zhì)分離，然后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測，消除共存物質(zhì)的干擾，提高化學(xué)發(fā)光分析的選擇性。向一根4mm×15mm的玻璃管內(nèi)填充10.0mg分子印記材料，兩端塞少許玻璃棉，使用前，使錳(IV)溶液和甲醛溶液的合并流通過MIP柱，除去MIP上的模板分子安乃近。當(dāng)試劑合并流通過MIP柱時(shí)，與柱上吸附的安乃近發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生發(fā)光信號，隨著MIP中安乃近的不斷消耗，發(fā)光信號逐漸降低，當(dāng)其與背景信號相同時(shí)，即可認(rèn)為MIP柱中安乃近已經(jīng)除盡。該方法線性范圍為1.0×10-7～1.0×10-5mol/L，LOD為4×10-8 mol/L，對1.0×10-6 mol/L安乃近溶液平行測定7次，RSD為2.4%，可用于尿液中安乃近的直接測定。

(2)超臨界流體色譜法(supercritical fluid chromatography，SFC)

SFC是以超臨界流體做流動(dòng)相，依靠流動(dòng)相的溶劑化能力來進(jìn)行分離、分析的色譜過程，是20世紀(jì)80年代發(fā)展和完善起來的一種新技術(shù)。Simmons等利用SFC測定血清中保泰松和羥布宗。色譜柱為Deltabond ODS (250 mm×1mm)，流動(dòng)相為二氧化碳-甲醇(95+5，v/v)，泵壓為170大氣壓，爐溫85～90℃，紫外檢測波長為240nm，測定時(shí)間為10～12min。該方法LOD為0.1μg/mL(保泰松)和1.0μg/mL(羥布宗)，CV為0.24%～4.94%，回收率在82%～83%之間。

(3)毛細(xì)管電泳法(capillary electrophoresis， CE)

CE是在電場作用下，利用毛細(xì)管中被分析的帶電分子因移動(dòng)速率的不同而達(dá)到分離的目的，是以毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場為驅(qū)動(dòng)力的新型液相分離技術(shù)。分析時(shí)，將毛細(xì)管內(nèi)充滿電解液，毛細(xì)管兩端通高壓電，使電解液內(nèi)帶電分子移動(dòng)到毛細(xì)管相反電荷的一端。分子大小不同，電荷比不同，在管中移動(dòng)的速率也不同，從而到達(dá)毛細(xì)管終點(diǎn)有快有慢，依此分離不同分子。Perrett等采用CE測定唾液中的安替比林。唾液樣品離心后直接進(jìn)CE測定。緩沖液為25mmol/L四硼酸鈉和50 mmol/L SDS (pH 9.6)，水動(dòng)力(hydrodynamic)上樣，上樣時(shí)間10s，運(yùn)行電壓25kV，溫度25℃，進(jìn)樣量50uL，檢測波長為260nm。該方法回收率為99.6%±4.8%，LOD為10 umol/L。

(4)氣相色譜法(gas chromatography， GC)

GC具有高效的分離能力和較高的靈敏度，能對樣品進(jìn)行有效分離。同時(shí)，滿足檢測器對待測物單一性的要求，極大地提高了對混合物的分離、定性和定量分析效率。GC分析安替比林及其代謝物可選用氮磷檢測器(nitrogen-phosphorus detector，NPD)和火焰離子化檢測器(flame ionization detector，F(xiàn)ID)。氨基比林、安替比林及其代謝物可以不衍生直接測定”。

1)NPD檢測

Abernethy等檢測血漿中安替比林和氨基比林殘留，用GC-NPD測定。色譜柱為填充3% SP-2250的玻璃柱(1.83m×2mm)，載氣為氦氣，流速為30mL/min，檢測器清洗氣為氫氣和干燥空氣，流速分別為3mL/min、50mL/min，進(jìn)樣口溫度310℃，柱溫230℃，檢測器溫度275℃。該方法LOD為1μg/mL，回收率大于95%，CV小于6.6%。Shively等測定唾液中的安替比林和氨基比林，氯仿提取液轉(zhuǎn)換溶劑后，不衍生直接進(jìn)GC-NPD測定。色譜柱為裝填3% SP-2250 DB的玻璃柱，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣體積1μL，柱溫、進(jìn)樣口溫度和檢測器溫度分別為230℃、250℃和275℃，載氣為氦氣，流速4mL/min。安替比林和氨基比林的線性范圍均為0～10μg/mL，CV為1.7%和2.4%，平均回收率為87%和95%。

2)FID檢測

Inaba等采用GC測定了尿液中安替比林代謝物。經(jīng)酶解的尿液樣品用乙酸乙酯提取后，不衍生直接進(jìn)GC-FID測定。色譜柱為裝填3% OV-17的玻璃柱(2mm×120cm)，柱溫為195℃，載氣為氮?dú)?，流?0mL/min尿液中NORA的LOD為1pg/mL，OHA為10pg/mL；NORA的CV小于3.1%，OHA為8.9%。

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