河豚魚、鰻魚中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素殘留測(cè)定

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

12.2.4.6 測(cè)定

(1)液相色譜條件

色譜柱： BEHC18， 1.7 μm，50 mm×2.1 mm (內(nèi)徑)或相當(dāng)者：流速： 0.4 mL/min；柱溫： 30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)： 350 nm；進(jìn)樣量： 10μL； 流動(dòng)相： A：乙腈，B： 2%甲酸溶液，梯度洗脫條件見表12-23。

表12-23 梯度洗脫條件

(2) 液相色譜測(cè)定

將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素的參考保留時(shí)間1.25 min，1.35 min，1.67 min， 1.77 min。土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素標(biāo)準(zhǔn)液相色譜圖見圖12-8。

圖12-8 土霉素、 四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)液相色譜圖

12.2.4.7 結(jié)果 與討論

(1)提取凈化條件的優(yōu)化

在本方法研究中，對(duì)比了用Oasis HLB單一固相萃取柱凈化和Oasis HLB固相萃取柱、羧酸型陽(yáng)離子交換柱雙柱凈化的凈化效果。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，只用Oasis HLB固相萃取柱凈化，在1.25 min、1.64 min均有比較大的干擾峰存在，當(dāng)土霉素、四環(huán)素、金霉素和強(qiáng)力霉素含量小于0.010 mg/kg，對(duì)檢測(cè)結(jié)果均有影響，如圖12-9所示；而采用Oasis HLB和羧酸型陽(yáng)離子交換柱雙柱凈化，從1 min到2 min之間均無(wú)干擾峰，見圖12-10。因此，本方法在國(guó)際AOAC標(biāo)準(zhǔn)AOAC 995.09的基礎(chǔ)上，增加了羧酸型陽(yáng)離子交換柱凈化步驟，改進(jìn)了凈化效果，減少了基質(zhì)干擾，提高了方法的準(zhǔn)確度。因此，增加羧酸型陽(yáng)離子交換柱凈化步驟是十分必要的。

圖12-9 Oasis HLB固相萃取柱凈化后樣品空白圖

圖12-10 Oasis HLB和羧酸型雙固相萃取柱凈化后樣品空白圖

(2) 流動(dòng)相配比的選擇

分別使用恒配比0.01 mol/L草酸+乙腈+甲醇(7+2+1， v/v/v) 和梯度洗脫(2%甲酸+乙腈)對(duì)土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素的分離度和靈敏度進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這兩種流動(dòng)相對(duì)4種四環(huán)素族抗生素的分離效果均很好，但檢測(cè)靈敏度和保留時(shí)間存在很大差異，當(dāng)使用恒配比0.01 mol/L草酸+乙腈+甲醇(7+2+1，v/v/v)作為流動(dòng)相時(shí)，土霉素和四環(huán)素檢出限為0.01 mg/kg、金霉素和強(qiáng)力霉素檢出限為0.020 mg/kg，且檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)。而使用(2%甲酸+乙腈)作為流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)土霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素檢出限為0.005 mg/kg，金霉素檢出限為0.01 mg/kg，靈敏度比恒配比洗脫要高1倍，且檢測(cè)時(shí)間也同時(shí)縮短。因此，本方法采用(2%甲酸+乙腈)梯度洗脫作為四環(huán)素族抗生素的流動(dòng)相。

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