牛奶和奶粉中7種喹諾酮類(lèi)藥物殘留量測(cè)定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

11.2.3.7 分析條件的選擇

(1)樣品前處理方法的優(yōu)化

牛奶和奶粉中含有大量的脂肪和蛋白質(zhì)，傳統(tǒng)的提取方法容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。嘗試用10%三氯乙酸：乙腈(9：1)作為提取劑，采用HLB，60mg/3cm3(WatersOasis)凈化，7種喹諾酮的回收率在43%～64%之間。將1%偏磷酸：乙腈(7：3)作為提取劑，濃縮乙腈后同樣采用HLB，60mg/3cm3(WatersOasis)凈化，回收率較低。結(jié)果表明，加入沉淀劑以后提取溶液容易凈化，但是回收率偏低，可能在沉淀蛋白的同時(shí)造成藥物的絡(luò)合或挾裹，造成損失。鑒于乙腈本身具有沉淀蛋白的作用，且條件較為溫和，采用乙腈及酸化乙腈作為提取劑，經(jīng)過(guò)大量的試驗(yàn)確定了乙腈及酸化乙腈的用量；通過(guò)結(jié)果比較，乙腈與酸化乙腈沒(méi)有顯著差異，最終確定以乙腈作為提取溶劑的實(shí)驗(yàn)方案。試驗(yàn)證明，提取兩次的回收率遠(yuǎn)大于提取一次。參考GB/T20757-2006《蜂蜜中十四種喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定方法液相色譜法-串聯(lián)質(zhì)譜法》，提取劑中加入pH=3磷酸鹽溶液，同時(shí)解決了乙腈沉淀蛋白能力較強(qiáng)，第二次提取時(shí)牛奶和奶粉中的固狀物不能充分在乙腈中溶解出現(xiàn)絮狀沉淀的問(wèn)題。

固相萃取技術(shù)是比較有效的凈化手段，本方法對(duì)比了HLB，60mg/3cm3(WatersOasis)、MCX60mg/3cm3(WatersOasis)、BONDELUT-SCX，500mg/3mL三種固相萃取柱的凈化效果，試驗(yàn)表明三種固相萃取柱的凈化效果均良好，但HLB柱回收率略高，因此本方法選擇HLB柱作為凈化柱。由于采用HLB柱凈化，上樣液中不能含有太多的乙腈，因此需要將提取液中的乙腈蒸干。

洗脫時(shí)，做流出曲線(xiàn)，采用3mL5%氨水甲醇可將7種喹諾酮完全洗脫下來(lái)，所以采用4mL 5%氨水甲醇作為洗脫液。該七種藥物中達(dá)氟沙星熱穩(wěn)定性差，在45℃氮吹吹干，就有將近50%的損失，濃縮一步應(yīng)注意不能將其完全吹干，待洗脫液吹至約0.2mL時(shí)，利用定容液將其補(bǔ)至1mL。

(2)色譜條件的建立

實(shí)驗(yàn)采用了0.1%乙酸-甲醇做流動(dòng)相，采用梯度洗脫，在150mm×2.1mm(i.d.)，粒度5μum的C18柱上，分析物得到了有效的分離，且峰形對(duì)稱(chēng)尖銳。

(3)質(zhì)譜條件的優(yōu)化

用蠕動(dòng)泵以10uL/min注入1μg/mL的7種喹諾酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)確定各化合物的最佳質(zhì)譜條件，包括選擇特征離子對(duì)，優(yōu)化電噴霧電壓、鞘氣、輔助氣、碰撞能量等質(zhì)譜分析條件。來(lái)確定各化合物的最佳質(zhì)譜條件，包括選分析物的混標(biāo)液進(jìn)入ESI電離源，在正、負(fù)離子掃描方式下分別對(duì)分析物進(jìn)行一級(jí)全掃描質(zhì)譜分析，得到分子離子峰。7種分析物在正模式下均有較高的響應(yīng)，負(fù)模式下信號(hào)值很低。然后對(duì)各分子離子峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析(多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM掃描)，得到碎片離子信息。其具體的質(zhì)譜條件為：鞘氣壓力，30unit；輔助氣壓力，5unit；正離子掃描模式；電噴霧電壓，4000V；毛細(xì)管溫度，320℃；源內(nèi)誘導(dǎo)解離電壓，10V；Q1和Q3狹縫寬度為0.4、0.7；碰撞氣為高純氬氣，碰撞氣壓力為1.5mTorr。分析物的保留時(shí)間采集窗口確定定性定量離子對(duì)及碰撞能量見(jiàn)表11-11。

(4)定量方式的選擇

實(shí)驗(yàn)對(duì)比了外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法兩種定量方式，由于只有氘代環(huán)丙沙星和氘代恩諾沙星兩種，且采用外標(biāo)法定量回收率較高，精密度較好，因此，用外標(biāo)法定量。

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